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Dec 17, 2023

アルファ

Quantità di farmaco BMC

BMC Medicine volume 21、記事番号: 90 (2023) この記事を引用

1225 アクセス

1 オルトメトリック

メトリクスの詳細

子癇前症 (PE) は、妊娠中の母体および胎児の罹患率/死亡率の主な原因の 1 つであり、α-2-マクログロブリン (A2M) は炎症性シグナル伝達と関連しています。 しかし、A2M が PE の発生に関与する病態生理学的メカニズムはまだ理解されていません。

PE の根底にある病態生理学的メカニズムを研究するために、参加者のヒト胎盤サンプル、血清、および対応する臨床データが収集されました。 妊娠中の Sprague-Dawley ラットに、妊娠 8.5 日目に尾静脈を介して A2M を運ぶアデノウイルス ベクターを静脈内注射しました。 ヒト臍動脈平滑筋細胞 (HUASMC)、ヒト臍静脈内皮細胞 (HUVEC)、および HTR-8/SVneo 細胞を A2M 発現アデノウイルス ベクターでトランスフェクトしました。

この研究では、PE 患者の血清、子宮らせん動脈、胎児胎盤血管系で A2M レベルが大幅に増加していることを実証しました。 A2M過剰発現ラットモデルは、PEの特徴(すなわち、妊娠中期から後期の高血圧、腎損傷の組織学的および超微細構造的兆候、タンパク尿、および胎児発育制限)をよく模倣した。 正常群と比較して、A2M の過剰発現は、早期発症型 PE の妊婦と妊娠ラットの両方で子宮動脈の血管抵抗を有意に高め、子宮らせん動脈リモデリングを障害しました。 我々は、A2M の過剰発現が HUASMC の増殖と正の相関があり、細胞アポトーシスと負の相関があることを発見しました。 さらに、結果は、トランスフォーミング成長因子ベータ 1 (TGFβ1) シグナル伝達が、上記の血管筋細胞増殖に対する A2M の効果を調節することを実証しました。 一方、A2Mの過剰発現はラット胎盤の血管新生を退行させ、血管新生関連遺伝子の発現を減少させた。 さらに、A2M の過剰発現は、HUVEC の遊走、糸状仮足の数/長さ、管形成を減少させました。 さらに、HIF-1α発現はA2Mと正の関連があり、胎盤由来のsFLT-1およびPIGFの分泌は、妊娠中のPEまたはラットにおけるA2M過剰発現と密接に関連していた。

我々のデータは、妊娠中のA2M過剰発現がPEを引き起こし、子宮らせん動脈のリモデリングや胎盤の異常な血管新生を引き起こす原因となっていると考えられることを示した。

査読レポート

多因子疾患である PE は、妊娠 20 週以降の妊婦における過剰なタンパク尿または臓器機能不全を伴う重篤な血圧状態です。 その病理学的メカニズムは現在までほとんど理解されていません[1、2]。 特に、PE は世界中で母子の罹患率と死亡率を引き起こす主な要因であり [3, 4]、その後の PE のリスクは特に深刻で、母親と赤ちゃんの両方の生命を危険にさらします [4]。 胎盤内の持続的な低酸素状態は、PE の発症の主要な要因です。 PE における低酸素誘発性の酸化ストレスは、血管新生促進因子 (血管内皮増殖因子 (VEGF) や胎盤増殖因子 [PlGF] など) と抗血管新生因子 (可溶性 fms 様チロシンキナーゼ 1 [sFlt1] など) との間の不均衡を引き起こす可能性があります。 、それによって胎盤の血管機能に影響を与えます[5]。 さらに、レニン - アンジオテンシン - アルドステロン系 (RAAS) は、早期発症型 PE の高血圧において重要な役割を果たしています。つまり、循環アンジオテンシン II (ANG II) に対する感受性が増加しています [6]。 さらに、正常な妊娠と比較して、PE における RAAS のほとんどの成分の血清レベルと活性、特に AT1R 自己抗体 (AT1R-AA)、Ang I、Ang II、および Ang-(1-7) のレベルが低下します。 7、8]。 これらの生物学的に活性な分子は、胎盤内の抵抗性動脈の血管収縮を促進し、PE の低酸素症の増加につながります。

増え続ける証拠は、PEの発症は栄養膜細胞の機能不全による血管リモデリングの過程における子宮螺旋動脈の不適切なリモデリングによる可能性が最も高いことを示しています[9]。 適切な子宮螺旋動脈リモデリングは、母体の子宮筋弾性壁の破壊により絨毛外栄養膜細胞 (EVT) の浸潤が促進されるとき、つまり上皮細胞および血管平滑筋細胞 (VSMC) が浸潤性 EVT に置き換えられるときに達成されます [10]。 子宮ナチュラルキラー (uNK) 細胞由来のトランスフォーミング成長因子 β1 (TGFβ1) は、血管平滑筋細胞のアポトーシスと遊走を制御し、らせん動脈の適切なリモデリングを確実にします [11]。 このプロセスが正しく進行しない場合、子宮らせん動脈の不適切なリモデリングにより胎盤への血液供給が制限され、胎盤低酸素症が引き起こされ、PE が発生する可能性が高まります [12]。

胎盤の血管新生の欠陥は、PE の発症に関与していると考えられています [13]。 たとえば、スラミン（VEGF阻害剤）、妊娠関連血漿タンパク質A2（PAPP-A2）、または妊娠中の酸化ストレスの誘発による胎盤血管新生の抑制は、母体の高血圧、胎盤機能不全、および胎児の発育遅延を引き起こす可能性があります。 PE の診断指標 [14、15、16]。 さらに、プロテインキナーゼ Cβ (PKCβ) の下方制御によるオートファジーの活性化は、胎盤血管新生の障害を引き起こし、最終的にはマウスに PE 様の症状を誘発します [17]。 総合すると、これらのデータは、PE の病因における不適切な胎盤血管新生の重要性を示唆しています。

A2M は、独自の「トラップ」機構で役割を果たす血清パンプロテアーゼ阻害剤です [18、19、20]。 さらに、A2M は、好中球によって放出されるプロテアーゼを捕捉して阻害することにより、抗感染症および抗炎症作用を発揮します [21]。 A2M は主に肝臓で合成され、脳、心臓、生殖管で発現され、これらの組織において、A2M は多くの生理学的機能や病理学的変化に関与しています [18、22、23]。 塩基性線維芽細胞増殖因子 (bFGF)、VEGF、PlGF など、さまざまな重要な血管新生因子が A2M に結合することによって不活化されます [22]。 特に、A2M は妊娠中に子宮の血管系を協調的に調節することができる [22]。このことが、PE との関連で A2M の生物学的機能を調査するきっかけとなった。 我々は、A2M発現の増加が妊娠中の子宮らせん動脈リモデリングと胎盤血管新生に負の役割を果たし、それによってPEの発症に寄与しているのではないかと仮説を立てている。

胎盤組織は、53 人の健康な妊娠と、早期発症型 PE の妊婦 (妊娠 34 週以前に診断された) 52 人から採取されました。 血清サンプルは、妊娠初期（正常群の健康な妊娠 22 名、PE 群の早期発症 PE 患者 18 名）、妊娠中期（健康な妊娠 23 名、早期発症 PE 患者 12 名）、妊娠後期（35 名）の妊婦から採取されました。健康な妊娠と早期発症の PE 患者 30 名）、および出産後 1 週間（健康な妊娠 18 名と早期発症の PE 患者 21 名）。 健康な妊娠と早発性PE妊娠を含むこれらの妊婦は、2018年1月1日から2021年5月23日まで、中国済南大学海外病院産婦人科産科に入院した。PE診断は発行された基準に基づいた。 2018 年に国際妊娠高血圧学会 (ISSHP) によって報告されました [24]。 組織採取の対象および除外基準を表 1 に示します。

胎盤絨毛および脱落膜組織は出産後すぐに収集され、氷冷リン酸緩衝生理食塩水 (PBS) で 2 ～ 3 回洗浄されて血液が除去され、さらなる研究のために液体窒素または 4% パラホルムアルデヒドで固定されました。 妊娠第 1 期の胎盤絨毛組織は合併症のない妊娠の場合から採取し、4% パラホルムアルデヒドで固定しました。 さらに、正常群と早期発症PE群の妊婦から、妊娠11～13+6週、在胎14～27+6週、妊娠1週目の3回のサンプリング時点で末梢静脈血を採取した。最後に入院した日（通常は出産前 1 週間以内）。 産後血液は出産後３日目から採取し、臍帯血は出産直後に採取した。 母体および臍帯血をEDTA真空採血管に集め、遠心分離（3000×g、4℃、15分間）し、上清（すなわち、血漿）を抽出し、さらなる研究のために-80℃で保存した。

この研究は、中国済南大学海外病院倫理委員会によって承認され（承認番号：KY-2021-054）、ヘルシンキ宣言に従って実施されました。 すべての研究参加者から署名されたインフォームドコンセントが得られました。

SPF Sprague-Dawley ラット (6 ～ 8 週齢、体重 180 ～ 200 g) は、Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd. (SCXK 2012-0001、北京、中国) から購入しました。 以前の報告[25]に基づいて、以前に記載されているように尾静脈注射を介してA2M過剰発現ラットモデルを確立しました[26]。 簡単に説明すると、在胎日 (GD) 8.5 にラット (非妊娠ラットを除く) に A2M を発現するアデノウイルス (OBiO Technology Co.、上海、中国) を注射し、配列決定の結果を追加ファイル 1: 補足結果 1 に示します。動物あたり約 1 ～ 2 × 109 pfu のアデノウイルスを注射し、アデノウイルスをリン酸緩衝生理食塩水 (PBS) に溶解して総量 400 μl にしました。 処置されたラットは、さらなる研究のためにGD19.5(妊娠第3期に相当)に屠殺された。 次のパラメーターが評価されました: 血圧、血流、タンパク尿。 この研究の主な結果は、血圧測定による高血圧です。 副次的結果としては、血流、タンパク尿、らせん動脈および胎盤血管の形態および細胞機能を測定するための組織学的分析が挙げられます。 ラットのサンプルでは、​​まず妊娠したラットを安楽死させて胎盤と胎児を採取しました。 リソース方程式アプローチ [27] に従って、合計 20 匹のラットを研究し、ラットを 2 つのグループ (各グループ n = 10) にランダムに分けました: 対照グループと A2M 過剰発現グループ (注: この実験で使用したラット)少なくとも 3 つの異なるモデリング バッチから来ています)。 乱数は、Microsoft Excel の標準 = RAND() 関数を使用して生成されました。 各ラットは実験後に頚椎脱臼により安楽死させた。 動物を含む実験は、ARRIVE ガイドラインに従って実行されました。 動物の治療を伴うすべての実験プロセスは、済南大学動物実験倫理委員会の手順に従って実施されました（承認番号：20210302-46）。

各動物について、以下のように少なくとも 7 人の異なる研究者が関与しました。JW は、ランダム化表に基づくグループの割り当てを知っていた唯一の人物でした。 PZ は JW の援助を受けて尾静脈注射を行った。 その後、GW は XC の支援を受けてデータ分析を実行しました。 最後に、PZ、GW、RL、および XY (これもグループの割り当てを認識していなかった) が結果の評価を担当しました。

以前に記載されているように[28、29]、意識のある妊娠ラットの血圧は、連続5回の訓練期間後に自動コンピューター化テールカフシステム(Visitech BP2000、Visitech Systems, Inc.、米国)を使用して測定されました。 高解像度超音波装置 (Esaote MyLab30 Gold、Esaote、Genova、Italy) を使用してラットの子宮動脈の血流を測定し、2 次元画像を取得しました。 尿タンパク質分析のために、GD7.5 および GD19.5 で 24 時間の尿サンプルを収集しました。

ヘマトキシリンおよびエオシン (HE) および過ヨウ素酸シッフ (PAS) 染色は次のように実行されました。 組織を 4% パラホルムアルデヒドで固定し、その後パラフィンに包埋しました。 次に、形態学的解析のために厚さ 4 μm の断面を処理し、HE または PAS で染色しました。

免疫組織化学的染色および免疫蛍光染色は次のように実施した。 ヒトまたはラットの組織を 4% パラホルムアルデヒドで固定し、脱水し、パラフィンワックスに包埋し、厚さ 4 μm で連続的に切片化しました。 切片を一次抗体とともに 4 °C で一晩インキュベートしました。 続いて、切片を蛍光二次抗体で染色した。 核をDAPI (Invitrogen)で染色した。 切片は蛍光顕微鏡 (Olympus BX53、東京、日本) を使用して画像化されました。 3 つのサンプルからの少なくとも 5 つのランダムな画像がグループごとに分析されました。 免疫組織化学的統計分析は、Fromowitz の包括的スコアリング法を使用して実施されました [30]。 抗体の詳細は、追加ファイル 1: 補足表 1 に記載されています。

ウエスタンブロッティング実験におけるヒトおよびラットの組織、HUASMC、HTR-8/SVneo 細胞、および HUVEC からのタンパク質は、以前に記載されているように少なくとも 3 回の反復で分析されました [31]。 抗体の詳細は、追加ファイル 1: 補足表 2 に記載されています。

全血サンプルは、ヒトおよびラットの母体血または臍帯血から収集されました。 血清中の試験対象物質は、製造業者（Mbbiology Biological、江蘇省、中国）の指示に従って、検出キットを使用して紫外分光光度法によって測定した。 キットの詳細は、追加ファイル 1: 補足表 3 に記載されています。

ラット腎臓からの生検（1 mm3）を 4 °C で 2 ～ 4 時間固定し、洗浄し、37 °C で一晩保存しました。 次に、固定されたサンプルを超薄切片作成用に準備しました。 ウランと鉛の二重染色後、サンプルを室温で一晩インキュベートし、画像を収集して透過型電子顕微鏡 (HT7700、日立、日本) で分析しました。

アネキシン V-FITC アポトーシス キット (88-8005-72、Thermo Fisher、米国) を使用して、フローサイトメトリー分析によって HUASMC および HTR-8/SVneo 細胞のアポトーシス率を測定しました。 FACS フローサイトメーター (Becton-Dickinson、サンノゼ、カリフォルニア州、米国) を使用して細胞を分析しました。 取得したデータは、FCS-Express ソフトウェア バージョン 3.0 (De Novo) を使用して分析されました。

細胞周期分析もフローサイトメトリーによって実行されました。 簡単に説明すると、細胞を収集し、PBS で洗浄し、その後エタノール (70%) で固定しました。 -20℃で一晩インキュベートした後、細胞をPIで染色し、フローサイトメトリーに供しました。 次に、細胞周期の G1、S、および G2/M 期の細胞の分布を決定しました。

ビヒクルまたは A2M 発現アデノウイルスベクターを 48 時間かけて投与した合計 5 × 105 個の HTR-8/SVneo 細胞または HUVEC を 6 ウェルプレートに播種し、コンフルエントな単層に達するまで増殖させました。 次に、2 μl ピペット チップを使用してスクラッチを作成しました。 遊走した細胞の画像は 0 ～ 36 時間で記録されました。 創傷閉鎖の割合を分析した。

トランスフェクトされた細胞（100μl無血清培地中の1×105個のHTR-8/SVneo細胞またはHUVEC）をトランスウェルインサート（8μm孔; #3422、Costar、ケンブリッジ、マサチューセッツ州、米国）に播種し、残りの細胞をトランスウェルインサートに播種しました。このプロトコールは以前に記載されている[32](注:細胞はプレートから採取される前に24時間血清飢餓状態にされた)。

HUVEC (5 × 104) を 24 ウェルプレートのマトリゲルでコーティングしたウェルにプレーティングし、6 時間インキュベートしました。 HUVEC チューブは倒立蛍光顕微鏡 (Nikon TE300、日本) で評価されました。 形成されたチューブの長さを分析した。 実験は３回繰り返して実施した。

私たちのすべての実験研究において、各実験は少なくとも 3 回実行され、盲検結果評価が実施されました。 3 つの値の平均変動係数 (CV) が計算され、これらの値に基づいて総平均 CV が決定されました。 統計分析は、SPSS 23.0 統計パッケージ プログラムを使用して実行されました。 統計チャートの構築は、GraphPad Prism 8 ソフトウェア パッケージ (GraphPad Software、カリフォルニア州、米国) を使用して実行されました。 T 検定は正規分布する連続変数の分析に使用され、マン・ホイットニー U 検定は歪んだ変数 (データは正規分布した) の分析に使用されました。 すべての値は平均値 ± SD または中央値 (四分位範囲) として表示されます。 比率は、フィッシャーの正確検定とピアソンのカイ二乗検定を使用して比較され、対照データと実験データの間に差異があるかどうかを確認するために使用されました。 P < 0.05 は有意であるとみなされました [31、33、34]。 すべての動物実験統計データと n の正確な値は、追加ファイル 1: 補足表 4 に示されています。

この研究では、53 人の健康な妊婦と早期発症型 PE の 52 人の妊婦のデータを統計的に分析し、臨床的特徴と検査室的特徴、および有害な妊娠転帰を評価しました (表 2)。 結果は PE の特性と一致しています (追加ファイル 1: 補足結果 2)。 ELISAと免疫蛍光染色を使用して、妊娠第2期および第3期の母体血清A2Mレベルが健常者と比較してPE患者で有意に上昇していることを実証しましたが、出生後期間には有意差はありませんでした（図1a）。 A2M および α-SMA の免疫蛍光染色は、A2M がヒト脱落膜基底部の螺旋動脈の平滑筋で主に発現されており (図 1b、d)、尿路内で α-SMA と A2M の発現が有意に高いことを示しました。 -改造された螺旋動脈よりも改造された螺旋動脈（図1c）。 さらに、PE脱落膜基底部では通常の妊娠よりも多くの未改造の螺旋動脈が発見されました（図1d、d1）。 さらに、らせん動脈の断面の免疫蛍光二重染色により、正常グループと比較してPEグループでのα-SMAおよびA2Mの発現が有意に高いことが実証され（図1d、d2〜d3）、これはウェスタンブロッティングデータによって確認されましたヒト脱落膜基底から（図1e、e1–e2）。

胎盤の母体部分と胎児部分における A2M 発現の評価。 a ELISAによる正常群およびPE群における妊娠の第1期、第2期、および第3期と出産後3日目に得られた母体血清中のA2Mレベルの測定。 b、c 妊娠第 1 期の脱落膜基底からの螺旋動脈の断面における A2M および α-SMA の代表的な免疫蛍光染色 (DAPI で対比染色) (b)、および c は、α-SMA の陽性発現領域の定量分析です。 α-SMA と A2M が容器全体に含まれます。 d、d1–d3 妊娠第 3 期の脱落膜基底からのらせん動脈の断面における α-SMA および A2M の代表的な免疫蛍光染色 (DAPI で対比染色) (d)、d1 は、未処理の比率の分析です。 d2〜d3は、血管全体におけるα-SMA（d2）およびA2M（d3）の陽性発現領域の定量分析です。 e、e1〜e2は、妊娠後期の脱落膜基底層におけるα-SMAおよびA2Mの発現を示すウェスタンブロッティングデータ（e）、およびe1〜e2は、α-SMA（e1）およびA2Mの発現の定量分析です（ e2) ノーマルグループとPEグループ。 f ELISAによる正常群およびPE群における臍帯血清中のA2Mレベルの測定。 g、g1は、妊娠第3期の絨毛絨毛膜におけるA2Mのレベルを示すウェスタンブロッティングデータ(g)、およびg1は、正常群およびPE群におけるA2M発現の定量分析である。 h 第 1 期または第 3 期の絨毛絨毛膜の断面の A2M 免疫組織化学的分析。 i 正常群および PE 群の妊娠第 3 期の絨毛絨毛膜の断面における代表的な HE および CD31 免疫組織化学染色。 j、j1-j2 正常群および PE 群の妊娠後期の絨毛膜の断面の VEGF および VEGFR2 免疫組織化学染色 (j)、および j1-j2 は VEGF (j1) および VEGFR2 (j2) の定量分析を示します。 2つのグループでの表現。 b と d のスケール バー = 100 μm。 h-j で 20 μm。 *P < 0.05、**P < 0.01、***P < 0.001

ELISAとウェスタンブロッティングを使用して、臍帯血清および絨毛絨毛中のA2Mレベルが健常者と比較してPE患者で有意に上昇しており（図1f、g、g1）、A2Mが血管内皮で特異的に発現していることを実証しました。 A2Mの免疫組織化学染色によって明らかになった、ヒト胎盤の絨毛絨毛膜（図1h）。 さらに、PE患者の胎盤では正常グループの胎盤よりも血管が少なく、血管容量が小さいことが観察されました（図1i）。一方、PEグループではVEGFとその受容体VEGFR2の発現が大幅に減少していることがわかりました（図1j、j1）。 -j2)。

A2M過剰発現ラットモデル（図2a）の確立の成功は、ELISA（図2b）およびウェスタンブロッティング（図2c、d）からのデータによって検証されました。 妊娠19.5日目に母体血清およびA2M過剰発現ラットのA2Mレベルが大幅に増加し（図2b）、A2M過剰発現ラットの脱落膜基底部（図2c、c1）および胎児胎盤（図2c、c1）でのA2Mタンパク質の発現が増加しました。図２ｄ、ｄ１）対照（ビヒクル）ラットと比較した。

A2M過剰発現ラットモデルにおける血圧および肝臓および腎臓の機能指数の評価。 ヒト化A2M過剰発現妊娠ラットモデルの確立の概略図。 b ELISAによる対照群およびA2M過剰発現群における、妊娠のさまざまな段階(GD7.5およびGD19.5)中の妊娠ラットの血清中のA2Mレベルの測定。 c、d、c1〜dIは、脱落膜基底部（c）および胎児胎盤（d）におけるA2Mのレベルを示すウェスタンブロッティングデータ、およびc1〜d1は、対照ラットおよびA2M過剰発現ラットにおけるA2M発現の定量分析です。 e – h 非妊娠ラット（e、f）と妊娠ラット（g、h）の両方における、対照群とA2M過剰発現群の収縮期血圧（e、g）または拡張期血圧（f、h）の変動の傾向。 i、j 両グループの腎臓の代表的な TEM 画像。 k–o コントロール群および A2M 過剰発現群のラット腎臓の断面の代表的な HE 染色 (k–l) および PAS 染色 (m、n)、および o は両群のボーマン腔の面積の定量分析を示します。 。 p 対照およびA2M過剰発現ラットからのGD7.5およびGD19.5の尿タンパク質(mg/24時間)レベル。 q-u コントロール群および A2M 過剰発現群のラット血清中の BUN (q)、CREA (r)、UA (s)、ALT (t)、および AST (u) のレベルの測定。 スケールバー = i、j で 5 μm。 k-n で 50 μm。 略語: TEM、透過型電子顕微鏡。 Enc、内皮細胞。 ポド、有足細胞。 キャップ、キャピラリー; BUN、血中尿素窒素。 CREA、クレアチニン。 UA、尿酸。 ALT、アラニンアミノトランスフェラーゼ。 AST、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ。 *P < 0.05、**P < 0.01、***P < 0.001

A2M過剰発現ラットモデルの症状がPEの臨床症状と一致するかどうかを評価するために、我々はまずビヒクルまたはA2M発現アデノウイルスベクターのいずれかを投与されたラットの血圧を動的に測定した。 結果は、A2M投与後の非妊娠ラットの血圧の変化は示さなかったが（図2e、f）、A2M投与ラットでは収縮期血圧と拡張期血圧の両方が、A2M投与後1週間以内に有意ではあるが徐々に上昇した（図2e、f）。 2g、h）。 ラット糸球体のTEM画像は、A2Mの過剰発現が浮腫、血管内腔の虚脱、内皮過形成などの糸球体の超微細構造損傷を引き起こしたことを明確に示しました（図2i、j）。 HE および PAS 染色は、A2M の過剰発現が実際に、対照と比較して炎症性細胞浸潤の増加、さらには糸球体における形態学的損傷（例えば、ボーマン嚢が狭くなるなど）を引き起こしていることを示しました（図 2k–o）。 BCAタンパク質アッセイを用いて24時間尿タンパク質測定を行ったところ、妊娠19.5日目で対照ラットと比較してA2M過剰発現ラットの有意な増加が示された（図2p）。 ELISA の結果は、対照ラット血清と比較して、A2M 投与ラット血清中の BUN および CREA レベルの有意な増加が示されましたが、ALT、AST、および UA レベルの有意な変化は示されませんでした（図 2q-u）。 さらに、母親のA2M過剰発現は胎児の発育制限（例、胎児の数が減ったり小さくなったり、胎盤が小さくなったり）を引き起こしました（追加ファイル1：図S1）。

A2M は早期発症型 PE の妊婦の血管平滑筋で高度に発現しているため、我々は、PE は子宮らせん動脈リモデリングの顕著な欠陥によって引き起こされ [35]、さらに胎盤の血管抵抗の増加につながるという合理的な仮説を立てました [36] (図.3a)。 したがって、ヒトの妊婦における一連の血管抵抗指数 [37] を評価しました (図 3b–g)。 その結果、臍帯PI（図3b）とRI（図3c）は、健康な女性と比較してPE患者の妊娠第2期および第3期に有意に増加し、左子宮動脈拍動性も有意に増加したことが示されました。指数（Lt ut-PI）（図3d）、右子宮動脈拍動指数（Rt ut-PI）（図3e）、左子宮動脈抵抗指数（Lt ut-RI）（図3f）、および健康な妊婦と比較した、PEのある妊婦の右子宮動脈抵抗指数（Rt ut-RI）（図3g）。 さらに、妊娠ラットの超音波評価（図３ｈ）は、Ａ２Ｍ過剰発現が対照と比較してＬｔ ｕｔ－ＰＩ（図３ｈ１）およびＬｔ ｕｔ－ＲＩ（図３ｈ２）を有意に増強することを示した。 免疫組織化学では、A2M過剰発現ラットのらせん動脈におけるα-SMAの発現の増強と、より未改造のらせん動脈が示されました（図3i、i1-i2）。 ウエスタンブロッティングによるα-SMA発現についても同様の結果が得られました（図3j）。

妊婦およびA2M過剰発現ラットにおけるらせん動脈リモデリングの指標の評価。 a らせん動脈リモデリングの失敗による PE 確立の概略図。 b、c 妊娠第 2 期および第 3 期における正常群および PE 群における臍動脈 PI (b) および RI (c) の値の決定。 d – g 最初の期間中の正常グループおよびPEグループにおけるLt ut-PI（d）、Rt ut-PI（e）、Lt ut-RI（f）、およびRt ut-RI（g）のレベルの決定。妊娠中期、妊娠後期。 h、h1 – h2 コントロールおよび A2M 過剰発現ラットのラット子宮らせん動脈の代表的な超音波検査 (h)、および h1 – h2 は、上記からの Lt ut-PI (h1) および Lt ut-RI (h2) の定量分析を示します。グループ。 i、i1-i2 対照群および A2M 過剰発現群のらせん動脈断面の α-SMA 免疫組織化学的分析 (i)。 i1 は α​​-SMA 発現の定量分析であり、i2 は 2 つのグループにおける領域ごとの非再構築らせん動脈の比率です。 j、j1 脱落膜基底層におけるα-SMAのレベルを示すウェスタンブロットデータ（j）、およびj1は、対照およびA2M過剰発現グループにおけるα-SMA発現の定量分析である。 スケールバー = i の 100 μm。 略語: PI、拍動性指数。 RI、抵抗指数。 中佐、左子宮動脈。 Rt ut、右子宮動脈。 *P < 0.05、**P < 0.01、***P < 0.001

HUASMC における A2M 発現を操作することにより、子宮らせん動脈平滑筋細胞の増殖とアポトーシスに対する A2M 発現の影響を調査しました。 CCK8アッセイ（図4a）およびウェスタンブロッティング（図4b、b1-b2）は、細胞増殖がA2M過剰発現グループで劇的に増加し、A2M下方制御グループで減少したことを示しました。 フローサイトメトリー分析により、HUASMCにおけるA2M発現のノックダウンは細胞周期の進行やアポトーシスに影響を及ぼさないことが示されましたが、A2Mの過剰発現はS期での細胞周期停止（図4c〜f）と細胞アポトーシスの抑制（図4g〜j）を引き起こしました。 。 人間のサンプルを使った実験により、次のような観察が裏付けられました。 α-SMAとPCNAの二重免疫蛍光染色は、ヒトPE患者の基底脱落膜におけるPCNA陽性細胞数の増加を示し(図4k、k1)、ウェスタンブロッティングによるPCNA発現についても同様の結果が得られた(図4l)。 。 さらに、ウェスタンブロット分析により、PE患者の基底脱落膜でFAS発現が減少していることが示されました（図4m）。

A2M 発現およびヒト脱落膜基底層の操作後のヒト臍動脈平滑筋細胞 (HUASMC) における増殖とアポトーシスの評価。 a、b、b1–b2 CCK-8アッセイによる、12、24、48、72、および96時間のインキュベーション後の対照、A2M過剰発現およびA2M下方制御グループにおけるHUASMC生存率の決定（a）。 HUASMC における A2M および α-SMA の発現を示すウェスタンブロットデータ (b)、および b1-b2 は、コントロール、A2M 過剰発現、および A2M-下方制御されたグループ。 c – f ネガティブコントロール（コントロール）（c）、A2Mサイレンシングベクター（A2Msi）（d）、またはA2M過剰発現ベクター（A2M）（e）でトランスフェクトされたHUASMCのDNA内容の分析を示すフローサイトメトリーデータ、およびfは、3つのグループにおける細胞周期の各期の細胞の割合の定量分析を示しています。 g – j ネガティブコントロール（コントロール）（g）、A2Mサイレンシングベクター（h）、またはA2M過剰発現ベクター（i）をトランスフェクトしたHUASMCのアポトーシスは、アネキシンV-FITC / PIアポトーシスアッセイを使用したフローサイトメトリーによって決定されました。 j は、3 つのグループにおける細胞アポトーシス率の定量分析を示しています。 k、k1 正常群およびPE群の妊娠後期のらせん動脈の断面におけるα-SMAおよびPCNAの代表的な二重免疫蛍光染色（DAPIで対比染色）。k1は両群におけるPCNA発現の定量分析を示す。 。 l、m PCNA（l）およびFAS（m）の発現、ならびに正常およびPEグループからの妊娠第3期のヒト脱落膜基底部の定量分析を示すウェスタンブロットデータ。 スケールバー = k で 50 μm。 *P < 0.05、**P < 0.01、***P < 0.001

A2M 過剰発現に関連した子宮らせん動脈リモデリングに対する EVT の効果 [38, 39] を決定するために、創傷治癒およびトランスウェル浸潤アッセイが使用されました。その結果、A2M 過剰発現が HTR-8 の遊走能力および浸潤能力を有意に抑制することが実証されました。 /SVneo セル (追加ファイル 1: 図 S2)。 また、A2Mの過剰発現に関連して、栄養膜細胞の増殖が減少し、細胞のアポトーシスが増強されることもわかりました（追加ファイル1：図S3）。

ウェスタンブロッティングにより、HUASMCでは、A2Mの過剰発現がPCNAおよびp-Smad2 / 3の発現を増強する一方、A2Mの下方制御により両方の遺伝子の発現が抑制されることが示されました（図5a、a1〜a4）。 さらに、TGFβ1の添加により、A2M、PCNA、およびp-Smad2/3の発現が有意に増加しました（図5b、b1-b4）。 ウェスタンブロッティングデータは、正常な妊婦と比較して、PE患者の基底脱落膜においてTGFβ1発現が上昇していることを実証した（図5c）。

A2M発現およびヒト脱落膜基底層の操作後の平滑筋細胞における増殖およびTGFβシグナル伝達の評価。 a、a1〜a4 ネガティブコントロール、A2M過剰発現、またはA2MサイレンシングベクターでトランスフェクトされたHUASMCにおけるA2M、p-Smad2/3、TGFβ1、およびPCNAの発現を示すウェスタンブロットデータ（a）、およびa1〜a4は、対照群、A2M過剰発現群、およびA2M下方制御群におけるA2M (a1)、p-Smad2/3 (a2)、TGFβ1 (a3)、およびPCNA (a4)の定量分析。 b、b1-b4 ネガティブコントロールでトランスフェクトし、TGFβ1 で処理し、A2M サイレンシング + TGFβ1 で処理した HUASMC における A2M、p-Smad2/3、TGFβ1、および PCNA の発現を示すウェスタンブロットデータ (b)、および b1-b4図は、対照群、TGFβ1処理群、およびA2Mサイレンシング+TGFβ1処理群におけるA2M（b1）、p-Smad2/3（b2）、TGFβ1（b3）、およびPCNA（b4）発現の定量分析を示しています。 c 正常群およびPE群の第3学期のヒト脱落膜基底層におけるTGFβ1の発現およびTGFβ1発現の定量分析を示すウェスタンブロットデータ。 d TGFβシグナル伝達経路を介して細胞増殖を引き起こすA2M過剰発現の概略図。 *P < 0.05、**P < 0.01、***P < 0.001

PAS染色により、胎盤全体のサイズに対する迷路のサイズの比率が、対照ラットよりもA2M過剰発現ラットの方が小さいことが示されました（図6a、a1）。 HE染色により、A2M過剰発現ラットの迷路層では、対照と比較して血液類洞の面積が減少していることが示された（図6a、a2）。 免疫蛍光染色により、対照ラットと比較して、A2M過剰発現ラットの迷宮ではA2Mの上昇とカベオリン1発現の減少が明らかになりました（図6b、b1-b2）。 これらの所見は、ラット迷路からのウェスタンブロッティングデータによって確認されました（図6c、d、c1〜d1）。 さらに、ウェスタンブロッティングにより、A2M過剰発現胎盤迷路におけるVEGFおよびCD31の発現が対照よりも有意に高いことが示されました（図6e、f、e1〜f1）。

A2M過剰発現ラットモデルにおける胎児胎盤血管新生の評価。 a、a1-a2 コントロールおよび A2M 過剰発現グループのラット胎盤の断面における代表的な PAS および HE 染色 (a)、および a1-a2 は胎盤迷路ゾーン (a1) および対照群およびA2M過剰発現群からの胎盤血液類洞の面積(a2)。 b、b1-b2 コントロールおよび A2M 過剰発現グループのラット胎盤の断面における A2M およびカベオリン 1 の代表的な免疫蛍光染色 (b)、および b1-b2 は、A2M およびカベオリン 1 発現の陽性領域の定量分析です (% ）。 c – f、c1 – f1 コントロールグループおよびA2M過剰発現グループの胎盤迷路ゾーンにおけるA2M（c）、カベオリン1（d）、VEGF（e）、およびCD31（f）の発現を示すウェスタンブロットデータ。 c1–f1 は、コントロールおよび A2M 過剰発現グループからの A2M (c1)、カベオリン 1 (d1)、VEGF (e1)、および CD31 (f1) 発現の定量分析を示します。 a の上部パネルのスケール バー = 2 mm。 aの下パネルでは100μm。 bでは50μm。 *P < 0.05、**P < 0.01、***P < 0.001

次に、創傷治癒およびトランスウェル遊走アッセイを使用して、HUVEC の遊走および浸潤能力を評価しました。 結果は、創傷閉鎖率（図7a、a1）と膜の下側に移動したHUVECの数（図7b、b1）の両方が、対照群と比較してA2M過剰発現グループで有意に減少したことを示しました。 図7cに示すように、糸状仮足は細胞遊走に影響を与えます。HUVECのF-アクチン染色は、対照と比較してA2M過剰発現HUVECにおける糸状仮足の長さと数が減少していることを示しました（図1c、c1〜c2）。 さらに、HUVECにおけるA2Mの過剰発現はZO-1発現を有意に減少させ（図7d、d1）、HUVEC管形成を有意に抑制しました（図7e、e1）。これは上皮細胞遊走能力の阻害を意味します。

A2M 発現の操作後の HUVEC の細胞遊走と管形成の評価。 a、a1 ネガティブコントロール（対照）またはA2M過剰発現グループからの24時間のHUVECの創傷治癒アッセイの代表的な画像（a）、およびa1は両方のグループにおける相対的な細胞遊走の定量分析を示します。 b、b1 24時間のインキュベーション後のネガティブコントロールベクターまたはA2M過剰発現ベクターのいずれかをトランスフェクトしたHUVECのトランスウェル遊走アッセイの代表的な画像（b）、b1は両グループの遊走細胞数の定量分析を示します。 c、c1 – c2 ネガティブコントロールまたはA2M過剰発現HUVECにおけるF-アクチンの代表的な蛍光染色と高倍率画像（c）、およびc1 – c2は、糸状仮足の数（c1）と長さ（c2）の定量的分析を示しています。両方のグループの各セルの。 d、d1 ネガティブコントロールまたはA2M過剰発現HUVEC上のZO-1の代表的な免疫蛍光染色（d）、およびd1は、両方のグループにおける相対的なZO-1蛍光強度（コントロールの％）の定量分析を示します。 e、e1 ネガティブコントロールまたはA2M過剰発現グループからの6時間および24時間のインキュベーション後のHUVECの管形成アッセイの代表的な画像、およびe1は、両方の6時間のインキュベーションにおける全長の管長（コントロールの％）の定量分析を示します。グループ。 a および e のスケール バー = 200 μm。 bとdでは50μm。 cでは20μm。 **P < 0.01、***P < 0.001

ウェスタンブロット法では、A2M過剰発現HUASMCにおいて高いHIF-1α発現が示されましたが、A2Mがダウンレギュレートされた場合にはHIF-1α発現に変化はありませんでした（図8b-b1）。 これらの結果は、螺旋動脈リモデリングの欠陥および胎盤血管新生の異常が虚血を引き起こし、それがさらに HIF-1α の高発現を誘導することを示唆しました。 注目すべきことに、妊娠のさまざまな段階で、正常グループと比較してPEグループではsFLT-1レベルが有意に高く、PIGFレベルが有意に低下していることがわかりました（図8c、d）。 子癇前症女性の母体血漿では、PIGF と A2M の間に負の相関関係 (R = −0.768、P <0.001)、sFLT-1 と A2M の間に正の相関関係 (R = 0.659、P <0.001) がありました (追加ファイル) 1：図S4）。 A2M過剰発現ラットモデルでは、妊娠19.5日の対照ラットと比較して、A2M過剰発現ラットの血清中でsFLT-1レベルが増加し（図8e）、PIGFレベルが減少しました（図8f）。

母体血清および A2M 操作 HUASMC における HIF-1α および sFIt-1/PIGF レベルの測定。 a A2M過剰発現の存在下での不適切な螺旋動脈リモデリングと異常な胎盤血管新生の概略図。 b、b1は、対照群、A2M過剰発現群、およびA2M下方制御群におけるHIF-1αの発現を示すウェスタンブロッティングデータ(b)、およびb1は、3つの群におけるHIF-1α発現の定量分析を示す。 c、d 正常群およびPE群の妊娠第1期、第2期、および第3期から得られたヒト母体血清中のsFLT-1（c）およびPIGF（d）レベルを示すELISAデータ。 e、f ELISAデータは、対照群およびA2M過剰発現群におけるGD7.5およびGD19.5の母性ラット血清中のsFLT-1(e)およびPIGF(f)レベルを示す。 *P < 0.05、***P < 0.001

以前の研究では、軽度の全身性炎症が実際に健康な妊婦で発生し、PEでは状態が悪化したことが実証されました[40]。 本研究では、A2Mレベルの上昇が、子宮らせん動脈リモデリングと胎盤血管新生に対する悪影響を介して、早期発症の子癇前症の発生に関与していることを報告しました（図9）。 A2M は内因性/外因性の炎症損傷を軽減できるため、肩峰下滑液包炎、外側上顆炎、アキレス腱炎などの整形外科的疼痛のさまざまな管理に使用されています [41]。 A2M は、変性疾患、免疫疾患、消化器疾患、泌尿器系疾患における炎症状態を確認するためにも使用されます [42、43、44、45]。 この研究では、PEを有する妊娠中の炎症促進性サイトカインと抗炎症性サイトカインの間の不均衡が発見され（追加ファイル1：図S5）、これはA2Mが妊娠中のPEの発症に関与している可能性を示唆しています。 独特のプロテイナーゼ阻害剤である A2M は、PE の炎症誘発性サイトカインを完全には除去しませんが、A2M の上昇は PE 様表現型の原因となる可能性があり、A2M が PE の発症において諸刃の剣の役割を果たす可能性があることを示唆しています [46] 。

PE の開発における A2M の役割の基礎となる仮定を示す提案されたモデル。 A2M が子宮らせん動脈リモデリングと胎盤血管新生に対する悪影響を介して PE の発生に関与するという提案されたメカニズム

子宮らせん動脈の変化と胎盤の血管新生はどちらも、胎盤を完全に灌流するのに十分な血液供給を提供し、したがって妊娠中の成長する胎児の需要を満たす重要な出来事である[47、48]。 したがって、何らかの理由で変更が中断された場合、その結果、らせん動脈の不適切な変更と胎盤血管新生の異常が生じ、PEシナリオのリスクが大幅に増加する可能性があります[49]。 したがって、この研究では、妊娠中の PE の発症における両方の事象に対する A2M 過剰発現の考えられる影響を調査しました。

私たちの臨床妊娠コホート研究では、A2M が妊娠後期から主にらせん動脈で発現しており、これは α-SMA の発現と同様であることが示されました。 早期発症型 PE の妊婦の血清中の A2M レベルは、妊娠中期および妊娠後期に有意に増加し、同様の結果がヒト子宮脱落膜基底層でも観察されました（図 1a ～ e）。子宮螺旋動脈のリモデリングが不十分。 言い換えれば、A2Mの過剰発現は、子宮らせん動脈のリモデリングに悪影響を与えることにより、PEの病態生理学と密接に関連している可能性があります。 私たちは、A2M が関連するプロテアーゼ、サイトカイン、および成長因子を阻害し [50]、これらがらせん状動脈リモデリング中の平滑筋細胞の生存と生理学的機能に影響を与えるのではないかと推測しました。 さらに、胎盤血管床におけるA2Mの過剰発現が胎盤血管新生を劇的に制限することを発見しました（図1f-j）。 したがって、胎盤絨毛の異常な血管新生は明らかに無視できない重要な要因です。 A2Mは血管平滑筋細胞の脂肪生成を促進することによってアテローム性動脈硬化に関与すると報告され[51]、PEにおける病理学的メカニズム、すなわち妊娠中の同様の血管病変の可能性を示唆していることに留意すべきである。

PEにおけるA2Mの関与の可能性を調査するために、非妊娠ラットおよび妊娠ラットにおいてA2Mの過剰発現が確立された(図2)。 非妊娠ラットと妊娠ラットの間でA2M過剰発現に対する異なる血圧反応は、A2M過剰発現によって誘発される血圧上昇が妊娠に関連していることを特に示しました（図2e-h）。 さらに、以下の表現型が観察されました：ラットの腎臓の形態学的変化とラットのタンパク尿は、間違いなくA2M過剰発現ラットのPEの発症に寄与し（図2i-u）、子宮内の発育制限と胎盤形成不全（追加ファイル1：図 S1) は PE の診断指標と極めて一致していた [52, 53]。 さらに、A2M の過剰発現は胎盤の血管新生も大幅に抑制しました (図 6)。 これらのデータはすべて、A2M 過剰発現と PE の間の因果関係をさらに調査するきっかけとなりました。

子宮螺旋動脈リモデリング[54]に関して、A2Mの過剰発現がHUASMC細胞の増殖を促進し、HUASMC細胞のアポトーシスを阻害することを発見しました（図4a〜j）。これは、子宮螺旋内皮細胞と平滑筋細胞の正常な置換が状況によって制限されていることを意味しますA2Mの過剰発現。 言い換えれば、A2Mの過剰発現は、子宮らせん動脈の内皮細胞および平滑筋細胞の通常進行性の破壊からのカスケード制御を妨げ、それによってPEを発症するリスクを増大させる可能性がある。 一方、栄養膜細胞の遊走と浸潤は子宮らせん動脈リモデリングにおいて非常に重要な役割を果たすため、A2M遺伝子によって過剰発現された栄養膜細胞の特徴が評価された[55、56]。 実験結果は、栄養膜細胞の遊走能力と浸潤能力の両方、ならびにアポトーシスと増殖が A2M 発現の上昇によって劇的に影響を受けることを明らかにし (追加ファイル 1: 図 S2-S3)、胎児由来の EVT が影響を受ける可能性があることを示唆しています。不明瞭なメカニズムを通じて A2M に過負荷がかかりました。 TGFβスーパーファミリーは生理学的条件と病理学的条件の両方で血管リモデリング中に血管内皮細胞および平滑筋細胞の反応を調節することが知られているため、上記の表現型にさらに取り組むために、A2M遺伝子操作後のTGFβシグナル伝達を評価しました[57]。 予想通り、我々の実験証拠（図5a、b）は、A2M遺伝子発現とTGFβシグナル伝達活性化との間の因果関係を明らかに示した。すなわち、TGFβシグナル伝達は、子宮内皮筋および平滑筋のA2M過剰発現誘発細胞反応の原因である可能性がある。上述の螺旋動脈は、不適切な血管リモデリングを引き起こします。 この所見は十分に確立されており、早期発症型PEの妊婦の子宮らせん動脈平滑筋でTGFβ1が高度に発現されていたという事実によって確認されています（図5c）。

一方、A2Mの過剰発現は、胎盤迷路の狭窄や特定の内皮マーカー（カベオリン1、CD31）およびVEGFの発現低下など、胎盤の血管新生に影響を及ぼした（図6）。 血管新生は、細胞の増殖、移動、接着、および管形成に関与しています[58]。 この研究では、A2Mの過剰発現は、おそらく内皮糸状仮足と細胞間接合の形成、さらには管形成を阻害することにより、HUVECの遊走を明らかに阻害しました（図7a〜e）。 これらの結果は、A2M の過剰発現が胎盤の血管新生に障害をもたらし、それが PE の発生を誘発または悪化させる可能性があることを明らかにしました。

早期発症型PEの開始事象は通常、胎盤虚血と低酸素症であると考えられており、これらは胎盤由来のさまざまな因子の放出を引き起こし、最終的には妊娠中の母体の血圧に影響を与える[59、60、61]。 A2M 誘発の平滑筋細胞の過剰な増殖は、不適切な血管リモデリングと異常な胎盤血管新生を悪化させ、これが胎盤虚血と低酸素症の重要な要因である可能性があります。 特に、虚血および酸素欠乏は、A2M遺伝子発現レベルと密接に関連していることが証明された(図8b)。 同様に、妊娠中期および/または妊娠後期のPE患者血清中のsFLT-1レベルの有意な増加とPIGFレベルの減少が観察され(図8c、d)、sFLT-1レベルとPIGFレベルは密接に関連していました。子癇前症の女性の母体血漿中のA2Mレベルとの関係（追加ファイル1：図S4）。 さらに、妊娠ラットの血清中のsFLT-1およびPIGFのレベルの変化の同様の傾向が、A2M過剰発現ラットでも明らかに観察された(図8e、f)。 これらの結果は、A2M の過剰発現が、胎盤虚血/低酸素症の悪化における胎盤由来のこれらの因子の放出の誘導に関与していることを示唆しています。

レニン-アンジオテンシン-アルドステロン系（RAAS）は、正常な妊娠における適切な子宮胎盤循環の維持およびPEの発達において非常に重要な役割を果たしている[62、63]。 さらに、アンジオテンシン II 1 型受容体アゴニスト自己抗体 (AT1-AA) は、PE 患者の女性で初めて発見され、胎盤虚血に応答してアンジオテンシン II 1 型受容体を活性化し、それによって胎盤血管系の血管収縮を増加させることができます [64]。 この研究では、RAAS および AT1-AA の多くのコンポーネントが PE で異常な発現を示しました (追加ファイル 1: 図 S6-S8)。 したがって、RAAS の調節不全は、A2M 過剰発現の状況において、その後の PE のメカニズムとして機能する可能性があります。

要約すると、我々のデータは、A2M が PE の病態生理学にどのように関与しているかを明確に示しました。 簡単に説明すると、A2M は主にらせん動脈の血管平滑筋および胎児胎盤血管系で発現され、そのレベルは PE の状況下で活性化された TGFβ1 の影響下で上昇します。 高い発現は、次に、子宮らせん動脈における血管平滑筋細胞の過剰な増殖およびアポトーシスの減少、ならびに不十分な栄養膜遊走および浸潤（すなわち、不適切な子宮らせん動脈リモデリング）を引き起こす。 一方、胎盤絨毛で過剰発現された A2M も胎盤の血管新生を大きく制限します。 2 つの包括的な結果は、胎盤虚血/低酸素症を悪化させ、胎盤からの sFLT-1 および PIGF の放出を変化させ、母体の高血圧、タンパク尿、および胎児の発育制限、つまり PE の発生を引き起こします。 さらに、この研究には、PEの進行におけるA2Mの関与の根底にある正確な分子機構の欠如、PEおよび対照サンプルの数の少なさ、前向き研究の欠如など、いくつかの限界がある。 最後に、PE の根底にある病態生理学的メカニズムに完全に対処するために、より統合された実験を計画することが重要です。 そうであれば、A2M は将来的に PE の潜在的なバイオマーカーおよび治療標的になることが期待できます。

現在の調査ではデータセットが生成または分析されていないため、データ共有はこの記事には適用されません。

α-2-マクログロブリン

アンジオテンシン II

アンジオテンシン II 1 型受容体作動性自己抗体

AT1R 自己抗体

基本的な線維芽細胞成長因子

酵素免疫測定法

絨毛外細胞栄養膜細胞

ヘマトキシリンとエオシン

ヒト臍動脈平滑筋細胞

ヒト臍帯静脈内皮細胞

左子宮動脈拍動指数

左子宮動脈抵抗指数

過ヨウ素酸シフ

リン酸緩衝生理食塩水

子癇前症

プロテインキナーゼCβ

プラセンタ成長因子

レニン-アンジオテンシン-アルドステロン系

右子宮動脈抵抗指数

可溶性 fms 様チロシンキナーゼ-1

トランスフォーミング成長因子β1

子宮のナチュラルキラー

血管内皮増殖因子

血管平滑筋細胞

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この研究に多大なるご支援とご協力をいただきました済南大学第一付属病院の産科医の方々に感謝するとともに、この研究に参加していただいたすべての妊婦に感謝いたします。

この研究は、中国広東省科学技術計画プロジェクト（番号 2022A1515012139）、中国済南大学第一附属病院臨床フロンティア技術プログラム（番号 JNU1AF-CFTP-2022-a01209）、および NSFC の支援を受けました。許可 (31971108、32170825、および 31771331)。 資金提供者は、研究の計画、データの収集または分析、出版の決定、または原稿の準備において何の役割も果たしていません。

Jingyun Wang、Ping Zhang、Mengyuan Liu はこの研究に同様に貢献しました。

済南大学第一附属病院婦人科産科、済南大学、No.613 Huangpu Road West、Guangzhou、510632、中国

Jingyun Wang、Ping Zhang、Mengyuan Liu、Zhenrui Huang、Xiaofeng Yang、Yuzhen Ding、Jia Liu、Fengxiang Zhang、Ruiman Li

胚発生と出生前医学の国際共同研究室、組織学および発生学部門、済南大学医科大学、広州、510632、中国

Jingyun Wang、Ping Zhang、Zhenrui Huang、Xiaofeng Yang、Yuzhen Ding、Xin Cheng、Shujie Xu、Meiyao He、Guang Wang、Xuesong Yang

ハイデルベルク大学、マンハイム大学医療センター、第 5 内科 (腎臓学/内分泌学/リウマチ学/呼吸器科)

ジンユン・ワン

済南大学教育省再生医療重点研究所組織発生学部門、No.601 Huangpu Road West、Guangzhou、510632、中国

Xin Cheng、Shujie Xu、Guang Wang、Xuesong Yang

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JW、PZ、ML、ZH が実験を設計し、実行しました。 XY、YD、JL は患者サンプルを収集し、臨床データを分析しました。 SX、MH、FZ がこの研究を発案しました。 XC は統計分析のサポートを提供しました。 GW、RL、および XY が作品をデザインし、最終的なコンテンツに対して主な責任を負いました。 すべての著者がデータを分析および解釈しました。 著者全員が最終原稿を読んで承認しました。

Guang Wang、Ruiman Li、または Xuesong Yang との通信。

この研究は、中国済南大学海外病院倫理委員会によって承認され（承認番号：KY-2021-054）、ヘルシンキ宣言に従って実施されました。 署名されたインフォームドコンセントが研究参加者全員から得られました。 動物治療を伴うすべての実験プロセスは、済南大学動物実験倫理委員会の手順に従って実施されました（承認番号：20210302-46）。

説明されている作品はこれまでに出版されていません。 他の場所での出版は検討されていません。 この原稿は共著者全員の承認を得ています。

著者らは、競合する利益を持たないことを宣言します。

シュプリンガー ネイチャーは、発行された地図および所属機関における管轄権の主張に関して中立を保ちます。

免疫組織化学用の抗体。 表S2。 ウェスタンブロッティング用の抗体。 表S3。 Elisa キットの詳細。 表S4。 動物実験の統計データ。 補足結果 1. A2M シーケンス結果。 補足結果 2. この研究に登録された妊婦の臨床的および検査上の特徴と有害な妊娠転帰。 図S1。 A2M過剰発現ラットモデルにおける胎盤および胎児の発育の評価。 図S2。 A2M アップレギュレーション後の HTR-8/SVneo 細胞遊走と細胞生存率の測定。 図S3。 A2M アップレギュレーション後の HTR-8/SVneo 細胞の増殖とアポトーシスの決定。 図S4。 子癇前症の女性の母体血漿中の PlGF、sFLT-1、および A2M レベル間の相関。 図S5。 ヒト炎症性サイトカインおよびNF-κBの血清および胎盤レベルの測定。 図S6。 ヒト血清中の RAAS システムの主要成分の決定。 図S7。 高レベルのA2Mの存在下でのラット血清中のRAASシステムの主要な成分の決定。 図S8。 高レベルの A2M が存在する場合の RAAS システムの主要コンポーネントの変化の概略図。

ウェスタンブロットのソースデータ。

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転載と許可

Wang、J.、Zhang、P.、Liu、M. 他。 α-2-マクログロブリンは、子宮らせん動脈のリモデリングおよび胎盤の血管新生に対する悪影響を介して、早期発症の子癇前症の発生に関与しています。 BMC Med 21、90 (2023)。 https://doi.org/10.1186/s12916-023-02807-9

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受信日: 2022 年 8 月 12 日

受理日: 2023 年 2 月 22 日

公開日: 2023 年 3 月 9 日

DOI: https://doi.org/10.1186/s12916-023-02807-9

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