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Mar 18, 2023

25OHD アナログと真空採血管は自動免疫測定法の精度に劇的な影響を与えます

Rapporti scientifici Volume 5,

Scientific Reports volume 5、記事番号: 14636 (2015) この記事を引用

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メトリクスの詳細

ビタミン D の定量方法にはばらつきが大きく、ビタミン D 類似体と採血方法の影響は系統的に検討されていません。 私たちは、5 つのイムノアッセイ システムと液体クロマトグラフィー - タンデム質量分析 (LC-MS/MS) を使用して、ビタミン D アナログ 25OHD2 および 3-epi 25OHD3 と採血法のビタミン D 測定への影響を評価しました。 25OHD2 または 3-epi 25OHD3 の有無にかかわらず、ルーチンのビタミン D アッセイ要求から血清サンプル (332) が選択され、さまざまなイムノアッセイ システムを使用して分析されました。 25OHD2 または 3-epi 25OHD3 を含まないサンプルでは、​​すべてのイムノアッセイが LC-MS/MS とよく相関しました。 しかし、シーメンスのシステムでは、凝固活性化剤とゲル分離剤を備えたチューブを使用すると、12.5 ng/mL という大きな正の平均バイアスが発生し、カッパ値が低下しました。 25OHD2 または 3-epi 25OHD3 が存在する場合、すべてのイムノアッセイで相関関係および臨床的一致が減少しました。 シーメンスシステムで測定したゲルと凝固活性化剤を含むバキューエットチューブ内の血清 25OHD は、添加剤を含まないバキュエットチューブに収集されたサンプルよりも大幅に高い値を示しました。 添加物を含まないチューブを使用すると、偏りが減少し、臨床的一致が大幅に改善されました。 結論として、ほとんどの自動イムノアッセイは、LC-MS/MS と許容可能な相関関係と一致を示しました。 ただし、25OHD 類似体と採血管は精度に劇的な影響を与えました。

ビタミン D と骨疾患 1、糖尿病 2、自己免疫疾患 3、心血管疾患 4 および癌 5 との関連性に関する最近の証拠が、ビタミン D 欠乏症が一般的であるという認識と相まって、世界中でビタミン D 検査の大幅な増加につながっています 1,6,7。 たとえば、メイヨークリニックでは、ビタミン D 欠乏症の検査が年間 80% ～ 90% ずつ増加しており6、私たちの研究室では、過去 2 年間で検査数が 2 倍になりました。 この作業負荷の増加のため、最近自動免疫測定法が開発されました。 ただし、ビタミン D レベルの検査に使用される方法には大きなばらつきがあります6、8、9。

循環 25 ヒドロキシビタミン D (25OHD) はビタミン D の主な形態であり、一般に血清ビタミン D 濃度の最も信頼できるバイオマーカーであると考えられています10。 25OHD3 と 25OHD2 は、25OHD の 2 つの主要なタイプです。25OHD3 は、日光曝露に反応して動物の皮膚で内因的に生成され、25OHD3 を含むサプリメントを通じて食事から摂取できます。 25OHD2 は菌類に含まれています。 25OHD2 または D3 は、サプリメントまたは乳製品などの食品への添加物として使用できます1。 しかし、25OHD3 のエピマーである 3-エピ 25OHD3 が最近同定されました。 この類似体の生物活性はまだ不明ですが 11,12、3-エピ 25OHD3 はイムノアッセイにおいて 25OHD3 との交差反応を引き起こし、25OHD レベルの過大評価につながることが示されています。

25OHD の検出のために、さまざまな自動イムノアッセイが開発されています。 ただし、研究室間のばらつきは 38% もあることが報告されています 6,8,13。 さらに、ビタミン D 欠乏症の定義は依然として議論の余地があり、方法間の大きなばらつきが論争の一因となっています。 このような大きな変動は、異なる方法でビタミン D 欠乏症に対する同じカットオフを使用する臨床診断用途にも問題となることが予想されます。 したがって、さまざまな方法の臨床的均一性を評価する必要があります。

同位体希釈液体クロマトグラフィータンデム質量分析法 (LC-MS/MS) は、25OHD テストのゴールドスタンダードおよび参照方法とみなされます 14。 しかし、最も日常的に使用されている LC-MS/MS アプローチや比較方法の基礎となったアプローチには、25OHD3 から 3-epi 25OHD3 を分離する操作は含まれていません。これは、クロマトグラフィーによる時間のかかる分析が必要となり、検出効率が低下するためです。 LC-MS/MS を使用して 3-epi 25OHD3 が測定されているのは、単独の研究のみです 14,15。

近年、いくつかの研究でビタミン D の検出方法が比較されています。 ただし、そのような方法が性能基準を満たしているかどうかについては議論の余地があります。 2012 年に、Farrell ら 8 は、5 つの自動イムノアッセイの性能を LC-MS/MS と比較し、Roche システムは最低性能目標を満たしていないと結論付けましたが、Ajuria-Morentin ら 9 は、Siemens システムはLC-MS/MS と比較して最大の偏りがあるが、この偏りについては明確な説明がない。 ビタミンD2とビタミンD3のサプリメントはどちらも中国とアメリカ合衆国（USA）で頻繁に使用されており、血中25OHD2および3-エピ25OHD311の有意な濃度の特定により、ロシュなどの一部のメーカーは製品を改善するために製品を更新することになった。異なる類似体の検出および定量効率を向上させます。 ただし、これらの新規イムノアッセイは、抗体の交差反応性や 25OHD2 と 25OHD3 の非等モル認識によって制限される可能性があります。 さらに、最新世代の 25OHD イムノアッセイ システムのパフォーマンスに対する 25OHD2 および 3-epi 25OHD3 の影響を評価した研究はありません。 正確な 25OHD 測定のさらなる問題として、真空採血管の使用が標準化されておらず、採血管が異なるとイムノアッセイの精度に影響を与える可能性があります。

この研究では、Roche Cobas E601 (Roche Diagnostics (Shanghai) Ltd.、バーゼル、スイス)、Siemens ADVIA Centaur XP (Siemens Healthcare Diagnostics (Shanghai) Co.、Walpole、USA)、DiaSorin Liaison XL ( DiaSorin、Saluggia、イタリア)、Abbott Architect I4000 (Abbott Diagnostics、米国イリノイ州ディアフィールド)、および IDS-iSYS (IDS France、Pouilly en Auxois、フランス) の参照 LC-MS/MS メソッドを使用して、25OHD2 および3-epi 25OHD3 は、5 つの自動イムノアッセイの精度と、真空採血管内の添加剤が 25OHD の検出に及ぼす影響を決定します。

2014 年 4 月から 6 月にかけて、生後 6 か月から 93 歳 (平均 ± SD; 46 ± 22 歳) までの男性 106 名と女性 226 名から、定期的なビタミン D アッセイの依頼により 332 の血清サンプルが収集されました。 サンプルは、ゲルおよび凝固活性化剤を含む VACUETTE 4 mL チューブを使用して収集されました (REF: 454067; Greiner Bio-one、オーストリア、クレムスミュンスター)。これには、25OHD3 (4.3 ～ 57.4 ng/mL) を含む 166 個の血清サンプル、25OHD2 (4.3 ～ 57.4 ng/mL) を含む 111 個の血清サンプルが含まれます。 2.5 ～ 78.4 ng/mL)、3-epi 25OHD3 (2.2 ～ 8.8 ng/mL) を含む 31 件の血清サンプル、および 25OHD2 (3.2 ～ 18.8 ng/mL) と 3-epi 25OHD3 (2.2 ～ 5.4 ng/mL) の両方を含む 24 件のサンプル)、25OHD3 と同様です。 この研究の時点では、LC-MS/MS が研究室で使用され、この研究のサンプルを選択するために使用されました。 血清サンプルは 6 つのアリコートに分割され、分析までの安定性を確保するために -80 °C で保存されました 16,17。

真空採血管内の添加剤が 25OHD 測定に及ぼす影響を調査するために、77 人の健康なボランティアが募集され、VACUETTE 4 mL 無添加チューブへの静脈穿刺によって各個人から絶食時の血液サンプルが採取されました (REF: 454001; Greiner Bio- 1つ）; その後、サンプルを 2 時間以内に遠心分離し (1200 × g、10 分)、自動イムノアッセイ システムと LC-MS/MS を使用して直ちに分析しました。

LC-MS/MS を使用して 25OHD を測定し、5 つの自動化学発光イムノアッセイ システムを評価しました。 さらに、アッセイ精度の評価のために 3 つの血清プールを調製しました。 LC-MS/MS メソッドにより、3 つのプールの平均 25OHD 濃度はそれぞれ 6.2、16.0、および 22.1 ng/mL であり、25OHD2 および 3-epi 25OHD3 の濃度は 2.5 ng/mL 未満であることが示されました。 3 つのプールから複数のアリコートを調製し、-80 °C で保存しました。 連続 5 日間、各プールの新たに解凍したアリコートをすべての方法を使用して 4 回アッセイしました。

この研究は北京連合医科大学病院の倫理委員会によって審査および承認されており、実験は承認されたガイドラインに従って実施されました。 研究対象者全員にサンプルの使用目的を書面で通知し、各自が書面による同意を提供しました。

LC-MS/MS は、Waters ACQUITY UPLC システム (Waters Corporation、米国マサチューセッツ州ミルフォード) と AB Sciex 4000 QTrap システム (Sciex Applied Biosystems、米国カリフォルニア州フォスターシティ) を併用して実行しました。 サンプル調製のプロトコールは次のとおりです。 血清サンプル、キャリブレーター、およびコントロールを 0.1 mM 水酸化ナトリウムで処理し、1 mM 硫酸亜鉛溶液および重水素標識同位体内部標準を含むメタノールで沈殿させました。 最後に 25OHD をヘキサンで抽出し、十分にボルテックスした後、4 °C、3148 × g で 10 分間遠心分離しました。 次に、上部のヘキサン相をガラスバイアルに移し、窒素下、40℃で25分間乾燥させ、乾燥残渣を150μLのメタノール/水(70:30)で再構成し、LC-MS/MSシステムにロードした。 LC-MS/MS によるクロマトグラフィー分離は、Phenomenex Kinetex PFP 分析カラム (100 × 3.0 mm、2.6 μm; Phenomenex Inc. Torrance、CA、USA) を使用し、移動相 A としてメタノール、移動相として 0.1% ギ酸水溶液を使用して実行されました。フェーズ B。アイソクラティック勾配は次のとおりです。0 ～ 2.0 分、70% A。 2.0 ～ 5.0 分、70% ～ 75% A。 5.0 ～ 6.5 分、75% A; 6.5 ～ 10.0 分、75% ～ 80% A。 10.0 ～ 11.0 分、80% A; 11.01 ～ 12.0 分、90% A; 流量は 0.5 mL/min でした。 カラムオーブンは分析中ずっと 45 °C に維持されました。 25OHD3 の重水素化類似体は 3-epi 25OHD3 および 25OHD3 の内部標準として使用され、25OHD2 の重水素化類似体は 25OHD2 の内部標準として使用されました。 MS/MS 検出は、正のエレクトロスプレー イオン化モードで操作されました。 多重反応モニタリング (MRM) 操作モードが使用され、各分析物に使用された MRM 遷移は次のとおりです: m/z 413.3 → 395.3 (25OHD2)、401.4 → 383.4 (25OHD3)、416.3 → 398.3 (25OHD2 内部標準、[ 2H]3-25OHD2) および 404.4 → 386.4 (25OHD3 内部標準、[2H]3-25OHD3)。 検量線は、25OHD2 および 25OHD3 およびそれぞれの内部標準のクロマトグラフィーのピーク面積の比を既知の濃度に対してプロットし、その後、データを当てはめるために線形回帰を行うことによって作成しました。 25OHD2 および 25OHD3 の定量限界 (LOQ) は、それぞれ 1.8 ng/mL および 1.2 ng/mL でした。 3-エピ 25OHD3 の特定のレベルは、25OHD3 および [2H]3-25OHD3 のキャリブレーションを内部標準として使用して定量化されました。 代表的なクロマトグラフを補足図 1に示します。 25OHD3 と 25OHD2 の両方の直線性範囲は 2.5 ～ 200 ng/mL で、両方の検量線で 0.999 より高い相関係数が得られました。 精度は米国標準技術研究所 (NIST) SRM 972a を分析することによって検証されました。 SRM 972a の基準値と比較して、25OHD2、25OHD3、および 3-epi 25OHD3 の測定における LC-MS/MS の精度は、それぞれ 104.5% ～ 106.8%、99.5% ～ 105.9%、および 108.0% ～ 109.9% でした。 回収率は、血清サンプルに 25OHD2 および 25OHD3 の 2 レベルをスパイクし、3 回分析することによって推定されました。 回収率は、測定値とサンプルに添加するために使用した標準物質の量の比として計算されました。 25OHD2 と 25OHD3 の平均回収率はすべて 100% 近くでした。 精度は、Bio-Rad の 3 レベルの品質管理サンプル (LiquichekTM Specialty Immunoassay Control、LOT: 57440) を分析することによって評価されました。 25OHD2 と 25OHD3 の合計変動係数 (CV) は、それぞれ 4.34% (2.88% ～ 7.01%) と 2.82% (2.45% ～ 3.21%) でした。

免疫測定法は、Roche Elecsys Vitamin D Total (ロット: 171102、取扱説明書 (IFU) バージョン: 06268668001V1,02/2011)、Siemens ADVIA Centaur Vitamin D Total (ロット: 39566029、10631021; IFU バージョン: 10699313、08/2012)、DiaSorin Liaison XL Total Vitamin D (ロット: 131192E; IFU バージョン: zh310600 43005、09/2014)、Abbott Architect 25-OHD ビタミン D (ロット: 0261) 4E000; IFU バージョン:49-8941/R02、05/2012) と IDS-iSYS (ロット:1996; IFU バージョン: IS-2700SPL V02、05/2014)。

データは、方法間の比較を評価するために、Passing-Bablok 回帰および Bland-Altman プロットによって分析されました。 対応のある t 検定を使用して、方法間の 25OHD 結果を比較しました。 ビタミン D 欠乏症のカットオフは 20 ng/mL でした1,18。 方法間の一致は、評価者間の一致（カッパ値）を使用して評価されました9。 カッパ係数を計算して、臨床的に関連するビタミン欠乏症 (20 ng/mL) を特定するためのさまざまな方法間の一致レベルを評価しました。 0.6 を超えるカッパ値は一致を示し、0.8 を超える値は優れた一致を示します9。 精度は、LC-MS/MS によって測定された 25OHD の 15% (P15) または 30% (P30) 以内にイムノアッセイによって測定された 25OHD を有する個人の割合として表されました。 5 つのイムノアッセイの P15 および P30 値をマクネマー検定によって相互に比較しました。 統計分析は、Microsoft Excel 2007 (Microsoft Corporation、米国) および MedCalc Statistical Software (バージョン 13.3.3、Brookstraat、Marikerke、ベルギー) を使用して実行されました。

すべてのイムノアッセイで 25OHD2 が検出されましたが、効率は異なりました。 DiaSorin のみが 25OHD3 の検出において 100% の検出効率を達成しました (表 1)。 ほとんどのイムノアッセイでは、3-epi 25OHD3 との交差反応性が 3% 未満でした。 しかし、Roche システムは 25OHD3 から 3-epi 25OHD3 を分離する効率が低く、91% の交差反応性を示しました。 興味深いことに、Roche システムの分析測定範囲は比較的狭い (3 ～ 70 ng/mL)。 対照的に、Roche および DiaSorin システムは他のプラットフォームよりも比較的精度が高く、CV と CV 間は両方とも 5% 未満でした。

全サンプルのうち、平均 ± SD 25OHD は次のとおりでした (図 1): 25.5 ± 12.0 ng/mL (LC-MS/MS)、24.6 ± 12.7 ng/mL (Abbott)、21.7 ± 11.1 ng/mL ( DiaSorin)、25.4 ± 9.9 ng/mL (IDS)、23.9 ± 12.5 ng/mL (Roche)、および 39.5 ± 19.8 ng/mL (Siemens)。 対応のある t 検定では、Siemens システムの結果が LC-MS/MS の結果より有意に高いことが示されました (P < 0.05)。一方、DiaSorin、Roche、および Abbott のイムノアッセイの結果は LC-MS/MS の結果より低かった (対応のある T 検定、P < 0.05)。 P15 および P30 によって推定された精度は、Abbott、DiaSorin、IDS、および Roche システムが相互に有意な差がないことを示しました (P15: それぞれ 43.67%、49.70%、45.18%、および 48.80%、マクネマー検定、p > 0.05) ; P30: それぞれ 76.20%、81.93%、76.81%、75.60%、マクネマーの検定、p > 0.05) ですが、その精度値はシーメンス システムの精度よりも大幅に高かった (P15: 14.76%、P30: 27.11%、マクネマーの検定)テスト、p < 0.01)。

合計 332 の血清サンプルでテストされたすべてのアッセイの結果の分布を示す箱ひげ図。

中央のボックスは、25 から 75 パーセンタイルの範囲を表します。 ボックス内の線は、テストされた各方法の中央値と中央値の 95% CI を示します。 ひげは、外れ値を除いて、最小値から最大値まで伸びます。 外れ値は、上位四分位または下位四分位プラスまたはマイナス四分位範囲の 1.5 倍を超える値として定義されます。

ほとんどのイムノアッセイ (シーメンスを除く) は、LC-MS/MS と許容できる診断的一致 (カッパ > 0.6) を示しましたが、Roche は最高のカッパ値を示しました (表 2)。 検出可能な 25OHD2 または 3-epi 25OHD3 が存在しない場合、Siemens を除くすべてのイムノアッセイは良好に一致しました。 男性と女性を別々に分析した場合、25OHD イムノアッセイの結果は、サンプル全体で観察された傾向と同様の傾向を示しました (補足表 1)。

さらに、方法間の違いを考慮して、回帰モデル（総サンプルから計算）を使用してイムノアッセイ方法のカットオフを転送しました。 移植後、ビタミン D 欠乏症の定義のカットオフは、それぞれ 20 (Abbott)、17 (DiaSorin)、21 (IDS)、19 (Roche)、および 31 ng/mL (Siemens) でした。 これらの移行されたカットオフを使用すると、シーメンスはカッパ値の最大の改善 (0.410 から 0.637 への増加) を示し、ほとんどのイムノアッセイで LC-MS/MS との許容可能な改善された一致が示されました (表 2)。

DiaSorin システムは 25OHD3 に対して 100% の効率と特異性で 25OHD を検出すると考えられていましたが、サンプルに 25OHD2 または 3-epi 25OHD3 が含まれている場合、相関係数が低下し、バイアスが増加し、カッパ値が大幅に減少しました (図 2)。 他の 4 つのイムノアッセイも同様の傾向を示しました (表 2)。 25OHD2 のレベルは、イムノアッセイ法 (Abbott、DiaSorin、IDS、Roche、Siemens の場合:それぞれ r = 0.848、0.909、0.834、0.849、0.282) と LC-MS/MS 間のバイアスと有意に相関しました (補足図 2)。 そして、25OHD2が存在しない場合、Rocheの医学的判断レベルでのバイアス%が最も小さかったが、25OHD2が存在する場合、医学的判断レベルでのバイアス%が有意に増加したことが示された(補足表2)。

ダイヤソリンとLC-MS/MSの比較。

A〜Eは、それぞれ、25OHD3のみを含む166の血清サンプル、25OHD3と25OHD2の両方を含む111の血清サンプル、25OHD3を含む31の血清サンプル、および332の血清サンプルすべてに対するPassing-Bablok回帰分析です。 F〜Jは、25OHD3のみを含む166の血清サンプルについてのDiaSorinとLC-MS/MSの間のバイアスを示すBland-Altmanプロットです。 25OHD3 と 25OHD2 の両方を含む 111 個の血清サンプル。 25OHD3 を含む 31 個の血清サンプル。 25OHD3、25OHD2、および 3-epi 25OHD3 を含む 24 個のサンプル。 および332の血清サンプルすべてをそれぞれ。

次に、真空採血管が免疫測定法の精度に影響を与えるかどうかを明らかにするために、VACUETTE 4 mL 無添加チューブとゲルと凝固活性化剤を含む VACUETTE 4 mL チューブの両方に採血した後、10 サンプルを分析し、すべてのサンプルを分析しました。 5 つのイムノアッセイと LC-MS/MS。 結果は図 3 に示されており、ゲルと凝固活性化剤を含む VACUETTE 4 mL チューブに収集されたサンプルは、添加剤を含まないチューブのサンプルよりも明らかに高い値を示すことが示されました (平均バイアス (SD): 12.7 (4.3) ng/mL 、P < 0.01)、シーメンス システムを使用します。 さらに 67 人のボランティアが募集され、彼らの血清が VACUETTE 4 mL 無添加チューブに収集され、VACUETTE 4 mL 無添加チューブに収集された合計 77 のサンプルがすべて Siemens システムと LC-MS/MS の両方で分析されました。 2 つの方法間の相関係数は改善され、バイアスは大幅に減少し、1 に近い傾きで一致を示しました (カッパ = 0.68) (図 4)。

25OHD 間のバイアスにより、ゲルと凝固活性化剤を含む VACUETTE 4 mL チューブと、各メソッドの無添加 VACUETTE 4 mL チューブが得られます。

X 軸: サンプル番号。 Y 軸: ゲルと凝固活性化剤を含む VACUETTE 4 mL チューブの 25OHD の結果から、無添加の VACUETTE 4 mL チューブの結果 25OHD を差し引いた値。

ゲルおよび凝固活性化剤を含む VACUETTE 4 mL チューブと無添加の VACUETTE 4 mL チューブでの Siemens と LC-MS/MS の 25OHD 結果の比較。

A と B は、ゲルと凝固活性化剤を含む VACUETTE 4 mL チューブに採取された血液について、Siemens と LC-MS/MS を使用して分析された 332 個の 25OHD サンプルの Passing-Bablok 回帰および Bland-Altman プロットです。 C および D は、VACUETTE 4 mL 無添加チューブに採取された血液について、Siemens および LC-MS/MS を使用して分析された 77 個の 25OHD サンプルの Passing-Bablok 回帰および Bland-Altman プロットです。

この研究では、332 人の血液サンプル中のビタミン D およびビタミン D 類似体を分析するための 5 つの異なるイムノアッセイ システムの精度の違いを調べました。 私たちのデータは、Siemens システムを除くほとんどのシステムが良好な受け入れ可能性と精度を示していることを実証しました。 さらに、シーメンスシステムでは、特定の採血管の使用が結果に大きな影響を及ぼしたので、25OHD 類似体と VACCUTTE チューブのイムノアッセイへの影響を補足表 3 にまとめました。これらのデータは、測定アッセイのさらなる開発と応用に影響を及ぼします。ビタミンDレベル。

近年、米国疾病予防管理センターのビタミンD標準化認証プログラム（CDC VDSCP）、国際ビタミンD外部品質評価スキーム（DEQAS）、ビタミンDなど、さまざまな組織がビタミンDの標準化研究を実施しています。標準化プログラム (VDSP) は、国立衛生研究所 (NIH) 栄養補助食品局、米国疾病管理予防センター、米国国立標準技術研究所 (NIST)、およびベルギー分析化学研究所 (ゲント、ベルギー) によって 2010 年に設立されました。ベルギー)19,20。 これらの組織は、25OHD2 および 25OHD3、さらには 3-epi 25OHD3 の効率的な検出を達成するために、ビタミン D 製品の改良も推進しています。 しかし、我々の知る限り、イムノアッセイ法に対する 25OHD2 および 3-epi 25OHD3 の影響に焦点を当てた研究はほとんどありません。 したがって、我々の現在の研究は、さまざまなイムノアッセイの精度と精度に対する 25OHD2 と 3-epi 25OHD3 の両方の効果を比較した最初の研究でした。

近年、研究者らは 25OHD を検出するためのさまざまな方法を比較しました。 ただし、一部の研究では方法間の高い相関関係が見つかったものの、最適な方法を一貫して決定することはできませんでした。 Farrell ら 8 は、テストしたすべてのイムノアッセイ法は LC-MS/MS と高い相関があり、回帰係数は 0.9 を超えていましたが、Roche システムでは相関係数が最も悪かった (r = 0.679) と報告しました。 実際、以前の研究で使用されたアッセイでは 25OHD3 しか検出できませんでした。 しかし、ロシュ社はビタミン D2 に重点を置いて、25OHD2 と 25OHD3 の両方を検出できるように製品を改良しており、実験では改良されたアッセイを使用しました。 以前のレポート 21 では、Siemens、DiaSorin、および Roche が LC-MS/MS と同様の許容可能な相関関係を生成することが示されましたが、Koivula ら 22 は、Abbott、DiaSorin、IDS、および Siemens のシステムでは回帰係数が低く、Siemens のシステムのみが生成したと報告しました。 IDS システムは LC-MS/MS と臨床的に良好に一致しました。 しかし、Ajuria-Morentin et al.9 は、Siemens システムが他のイムノアッセイ法と比較して相関性が最も低く、バイアスが最も大きいことを示し、これは我々の結果と一致しています。

イムノアッセイ法の間の実質的な違いは、25OHD2 と 3-epi 25OHD3 の測定能力の違いに部分的に関係している可能性があります。 すべてのメーカーは自社のイムノアッセイ法で 25OHD2 を検出できると主張しており、DiaSorin 社は自社の抗体が 25OHD2 と 25OHD3 に対して同等のモル効率を有すると主張していましたが、サンプルに 25OHD2 が含まれている場合はすべての回帰係数が減少し、イムノアッセイ法と LC-MS/MS 間の偏りは相関していました。 25OHD2のレベルで大幅に増加します。 現在、中国と米国ではビタミンD2とビタミンD3の両方のサプリメントが使用されていますが、一般的な免疫測定法による25OHD2測定の一貫性が満足のいくものではない可能性があることが我々の結果から示されているため、ビタミンD欠乏症の診断には問題があります。 これらの結果は、Abbott と Siemens のシステムのみが 25OHD223 と不満足な反応性を示したという Le Goff らの研究結果と一致しませんでした。 さらに、すべてのメーカー（ロシュを除く）は、自社のアッセイには 3-epi 25OHD3 との交差反応性がほとんどないと主張していましたが、当社の結果は、テストしたすべてのイムノアッセイについて、サンプルに 3-epi 25OHD3 が含まれている場合、LC-MS/MS との相関が大幅に減少することを示しました。 。 私たちのサンプル中の 3-エピ 25OHD3 のレベルは、合計 25OHD と比較して比較的低かったです。 一方で、これは、3-エピ 25OHD3 と 25OHD324 を区別および分離できない LC-MS/MS メソッドに、3-エピ 25OHD3 が日常的に影響を与えるとは予想されないという概念を裏付ける可能性があります。 一方、サンプル中に存在する 3-epi 25OHD3 のレベルが低いことを考慮すると、イムノアッセイの結果に比較的重大な影響を及ぼしました。 したがって、我々の研究のサンプル中の 3-epi 25OHD3 のレベルが低く、頻度が低いことは、我々の研究の重要な限界を表しています。 今後の研究では、サンプル中の 3-epi 25OHD3 の濃度増加の影響を調べる必要があります。

これまでの研究では、一貫した結果を達成するには、研究室が施設固有の基準間隔とプロトコルを開発する必要があることが示されています9。 さらに、我々の結果は、均一性を向上させるにはサイト固有の基準間隔が必要であるという提案を裏付けています。 ただし、改善の程度はプラットフォームによって異なります。 たとえば、回帰式に従ってカットオフ値を転送すると、シーメンスのシステムは他の方法よりも改善されました。

ビタミン D 欠乏症の基準値は物議を醸しているトピックです 25。 IOM は、12 ng/mL で正常な成人の必要量を満たすことができると推奨しています26。 対照的に、内分泌学者はビタミン D に関する多くの研究を検討し、ビタミン D 欠乏症の定義としては 20 ng/mL がより適切なカットオフであると結論付けました 18。 私たちの結果によると、この論争は、さまざまな研究で使用されているさまざまな免疫測定法によってさらに悪化する可能性があります。 今後は、LC-MS/MSなどの参考手法を用いた論文に基づいてビタミンD欠乏症を定義する必要がある。 しかし、今回の研究や他の研究によって検出されたシーメンスによって生じた大きな偏り9を考慮すると、この特定のシーメンスシステムはビタミン D 類似体の存在下でさまざまな結果を生み出すことが予想され、使用されるカットオフ値に敏感です。 シーメンスは、2014 年 10 月に米国 CDC が主催するビタミン D の第一次ホルモン標準化プログラムに合格しました。この標準化プログラムでは、平均バイアスが 5% 以内であることが許容基準として認められており、シーメンス ヘルスケア ダイアグノスティックスと IDS が唯一認定されたイムノアッセイ法です。 したがって、この文脈では、私たちの研究と Ajuria-Morentin らによる研究 9 の結果はやや混乱しています。 Borai は、25OHD327 の測定において BD 血清分離管がアボットおよびディアソリン免疫測定法に影響を及ぼさなかったと報告しましたが、VACUETTE 採血管がシーメンス免疫測定法に及ぼす影響は不明でした。 私たちの分析では、当院で 25OHD を測定するために一般的に使用されているゲルと凝固活性化剤を含む VACUETTE チューブを使用すると、Siemens システムを使用して添加剤を含まないチューブに収集されたサンプルよりも大幅に高い測定値が得られることがわかりました。 ただし、重要なのは、LC-MS/MS では、使用したチューブの種類による大きな偏りは生じませんでした。 添加剤を含まないバキュエットチューブに採取された血液サンプルの 25OHD の結果は、LC-MS/MS と比較して優れたパフォーマンスを示しました。 このような観察の理由は理解されていません。 凝固活性化剤、分離ゲル、またはゲルと凝固活性化剤を備えた VACUETTE 4 mL チューブ内のその他の要素により、磁性粒子標識抗体とアクリジニウム エステル間の非特異的交差反応性が増加し、化学発光値が増加した可能性があります。 管メーカーとシーメンスは製品の特定の組成に関して機密保持を維持しているため、これらの可能性を完全に解明することはできません。 したがって、特にシーメンスシステムの場合、具体的な影響は不明ですが、どの採血管が信頼性の高い使用に適しているかを判断することが重要になります。 私たちの結果は、25OHD イムノアッセイを選択する際に採血管の影響を評価する必要性を強調しています。 シーメンスシステムを使用した 25OHD の測定に採血管が干渉するメカニズムを解明するには、さらなる研究が必要です。

要約すると、我々の結果は、検出可能な 25OHD2 または 3-epi 25OHD3 が存在しない場合、ほとんどの自動イムノアッセイが LC-MS/MS と許容可能な相関関係および一致を示すことを示しました。 しかし、25OHD2 または 3-epi 25OHD3 のいずれかの存在は、イムノアッセイ法の結果に大きな影響を与えました。 したがって、ビタミン D 欠乏症のカットオフ値を定義するときは、方法間の違いを考慮する必要があります。 さらに、シーメンスシステムを使用する場合、臨床検査室または疫学調査で 25OHD を測定するには、適切な真空採血管を使用することが不可欠です。

この記事の引用方法: Yu, S. et al. 25OHD 類似体と真空採血管は、自動免疫測定法の精度に劇的な影響を与えます。 科学。 議員 5、14636; 土井: 10.1038/srep14636 (2015)。

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著者らは、シーメンス、IDS、DiaSorin、Roche、Abbott を含むメーカーの試薬提供と技術支援に感謝の意を表します。 この研究は、中国国家臨床主要主題プログラムおよび中国国家ハイテク研究開発プログラム (863 プログラム、2014AA022304) および中国国家自然科学財団 (81201337、81171665) によって資金提供されました。 資金提供団体は、この研究の実施や実行された分析には関与しておらず、出版の決定にも関与していません。

Yu Songlin、Cheng Xinqi、Fang Huiling はこの研究に同様に貢献しました。

臨床検査部、北京連合医科大学病院、中国医学院、北京、100730、中国

Songlin Yu、Xinqi Cheng、Huiling Fang、Jianhua Han、Xuzhen Qin、Qian Cheng、Wei Su、Li'an Hou、Liangyu Xia、Ling Qiu

中国日中病院臨床検査部、北京、100029、中国

張瑞平

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QL が研究を設計しました。 YS と FH は、論文の執筆だけでなく、データの取得、分析、解釈にも貢献しました。 CX、ZR、HJ、QX、HL、SW、XL、CQ が調査を実施し、被験者を募集し、サンプルを分析してデータを収集しました。 著者全員が原稿をレビューしました。

著者らは、競合する経済的利害関係を宣言していません。

この作品は、クリエイティブ コモンズ表示 4.0 国際ライセンスに基づいてライセンスされています。 この記事内の画像またはその他のサードパーティ素材は、クレジットラインに別段の記載がない限り、記事のクリエイティブ コモンズ ライセンスに含まれています。 素材がクリエイティブ コモンズ ライセンスに含まれていない場合、ユーザーは素材を複製するためにライセンス所有者から許可を得る必要があります。 このライセンスのコピーを表示するには、http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/ にアクセスしてください。

転載と許可

Yu、S.、Cheng、X.、Fang、H. 他。 25OHD 類似体と真空採血管は、自動免疫測定法の精度に劇的な影響を与えます。 Sci Rep 5、14636 (2015)。 https://doi.org/10.1038/srep14636

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受信日: 2015 年 6 月 2 日

受理日: 2015 年 9 月 2 日

発行日: 2015 年 9 月 30 日

DOI: https://doi.org/10.1038/srep14636

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